上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主要ELISA試劑盒，主要合作對象是學(xué)校，醫(yī)院、研究所等科研單位。學(xué)校客戶以新手為主。所以常有客戶咨詢未處理陰性對照需要做梯度稀釋嗎：以小鼠血清為例，小鼠的血清是直接拿來作為陰性對照，還是要進(jìn)行稀釋？如果要稀釋，該怎么稀釋才科學(xué)？

從理論上說，陰性對照的血清，不論稀釋多少倍，OD值都不應(yīng)該有明顯變化。有兩種可能：

1.正常小鼠本身含有該抗原的抗體；

2.ELISA過程中非特異性反應(yīng)去除不干凈，如洗板、孵育溫度時間、抗原抗體濃度等，這樣稀釋倍數(shù)越高的樣本其對結(jié)果的影響就越小，就呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢。你的陰性孔的OD值有多少呢，正常情況應(yīng)低于0.1，不然就要優(yōu)化下整個實驗體系了。
判斷陰陽性，以陰性O(shè)D值的2倍作為判斷標(biāo)準(zhǔn)只是根據(jù)我們一般的經(jīng)驗而定，更科學(xué)的方法是，測定一批陰性樣品（比如20個以上），計算OD平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，以平均值+2或3倍標(biāo)準(zhǔn)差作為陰陽性的界限。

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